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11 janvier 2014 6 11 /01 /janvier /2014 07:41

 

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MEDICINE & CHINESE TRADITIONAL MEDICINE 

Luigi39tab-copie-1.jpgLuigi Mattera is a certified by CERFPA (St. Laurent du Var-France) in HOMEOPATHY (biennale) & ZUO TUINA MASSAGE OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE - Online certificate from TEXAS CHIROPRACTIC COLLEGE (Pasadena-Texas 2007) in CHIROPRACTIC SPORTS & CHIROPRACTIC TREATMENT OF GOLF INJURIES.

In the past, he has been Captain aboard tanker ships . He got  Italian UNIVERSITY DOCTORATE in Foreigner and Litterature Languages (IULM Milano - Italy) and 3 years UNIVERISTY DIPLOMA in Public Relations and Discipline Administration (ISTITUTO UNIVERSITARIO LINGUE MODERNE -  Milano)

 

PRESENTS:  Royal Monaco Médecine

Chlamydia trachomatis: vingt minutes pour en détecter l'infection


 

 

Responsable de la majorité des infections sexuellement transmissibles (IST) d'origine bactérienne, Chlamydia trachomatis affecte en moyenne de 5 % à 10 % de la population et est particulièrement répandue chez les jeunes en âge de procréer. Source d’infections qui peuvent être sévères, c’est une cause majeure d’infertilité. La fréquence du portage asymptomatique avec persistance d’une infection à bas bruit pose un véritable problème de santé publique. La détection du germe utilise classiquement des techniques basées sur la PCR (polymerase chain reaction) avec amplification d’un gène de l'ADN chromosomique de la bactérie, de l'ARN ribosomique, ou d’une séquence spécifique de l'ADN extrachromosomique. Très sensibles et spécifiques,  les techniques d'amplification génique ont l’inconvénient de nécessiter un laboratoire central possédant des automates d'amplification et de détection coûteux et du personnel formé.

Une équipe de chercheurs a mis au point une méthode rapide et sensible utilisable sur échantillon urinaire permettant de s’affranchir de l’étape de purification de l’ADN et ne nécessitant pas d’équipement spécialisé. En alternative à la PCR, elle fait appel à une méthode d’amplification isotherme de l’ADN, la RPA (recombinase polymerase amplification) directement à partir d’échantillons d’urine lysés.

Amplification par recombinase polymérase

La RPA est une technique récente qui couple un amorçage spécifique utilisant un complexe recombinase à une synthèse d’ADN par déplacement de brin. Les réactions sont sensibles, spécifiques et rapides et fonctionnent à basse température. La méthode décrite a une limite de détection de 5 à 12 agents pathogènes par test, du même ordre que les autres techniques basées sur l’amplification génique, et permet en 20 minutes une détection à partir d’urine non purifiée.

La RPA utilise cinq ingrédients principaux: un échantillon de l'ADN à amplifier, un complexe amorce-recombinase, qui déclenche le processus de copie ; les nucléotides à partir desquels se forment les nouveaux brins ; une polymérase qui les assemble dans le bon ordre, et des protéines de liaison à l'ADN simple brin, qui contribuent à maintenir l'ADN d'origine tandis que le nouvel ADN est en cours. Le complexe amorce-recombinase est en mesure de se fixer à l'ADN double brin, ce qui élimine la nécessité du chauffage. Une fois le complexe en place, il se désassemble, permettant à l'ADN polymérase de commencer la synthèse d'un nouveau brin d'ADN complémentaire, tandis que les protéines de liaison attachent et stabilisent le brin déplacé. Dans des conditions précises,  le processus se répète automatiquement, entraînant une augmentation exponentielle de l’ADN.

Validation chez 70 patients

Pour l’identification et l’amplification par RPA, les chercheurs ont sélectionné un fragment du gène CDS2 conservé dans les souches de C. trachomatis sexuellement transmissibles. Le plasmide est présent en multiples copies par génome bactérien.

La méthode est testée chez 70 patients de 18 à 25 ans d’une clinique estonienne (51 femmes et 19 hommes) adressés par leur médecin pour des tests de dépistage d’IST, qui fournissent un échantillon d’urines du premier jet. Les lysats utilisés pour la RPA sont préparés par chauffage de l’échantillon pendant cinq minutes à 90°C. Pour comparaison les échantillons sont aussi testés par une méthode usuelle validée sur automate.

Dans la RPA, jusqu’à 5 µL d’urine peuvent être utilisés sans inhibition de la réaction d’amplification et la détection nécessite un minimum de 0,05 µL d’urine traitée par la chaleur. Le processus complet prend moins de 20 minutes : les 5 minutes d’incubation à 90°C sont suffisantes pour relarguer tout l’ADN des cellules, et l’amplification nécessite 10 minutes à 38°C. Cinquante-huit  échantillons sont négatifs par les 2 méthodes, soit une spécificité de 100 % pour l’essai RPA (Intervalle de confiance 95 % :92 %-100 %). Sur 12 échantillons d’urine positifs selon la méthode usuelle (dont 3 correspondant à des cas symptomatiques), 10 sont positifs par RPA et 2 sont négatifs, en utilisant 5 µL de lysat urinaire. La sensibilité de la méthode est ainsi estimée à 83 % (IC 95 % : 51 %-97 %).

Au final, cette procédure simple ne nécessite ni thermocycleur ni appareil coûteux et a l’avantage de pouvoir être réalisée rapidement sur place avec de bonnes spécificité et sensibilité.

Dominique Monnier

 

 

 

 

 

 

Références
Krõlov K et coll. Sensitive and Rapid Detection of Chlamydia trachomatis by Recombinase Polymerase Amplification Directly from Urine Samples. J Mol Diagn., 2014; 16: 127-35

 

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Published by ROYAL MONACO - dans MEDECINE
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